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UltiMate 3000中文手册 东莞全芯实验室设备维修中心，整理出来的建议用途，UltiMate 3000中文手册，更多详细的使用及维修方法，在电路板维修培训课程会详细讲解
官方建议： 将 Thermo Scientific™ UltiMate 3000 快速分离荧光检测器 FLD-3400 用于需要灵活地检测在光谱紫外-可见光区域内不吸收的新化合物的方法开发实验室。 灵敏的荧光性能
易于使用的荧光检测器
中文使用手册 技术说明92 将荧光检测与UHPLC相结合： 技术要求概述 介绍 分析师更频繁地转移HPLC 应用于UHPLC方法以提高实验室效率， 和/或方法分辨率。在下进行分离 但是，UHPLC条件会增强技术水平 分离柱和UHPLC的要求 仪器。泵和自动进样器必须处理 UHPLC色谱柱产生的工作压力 小于3 µm或小于2 µm的颗粒。 UHPLC兼容的紫外线 检测器具有很高的数据收集率，可以准确地 精确整合窄的分析物谱带。另外，他们 必须使用小体积流通池来解决这些问题 小体积UHPLC分析物谱带 与UHPLC兼容的要求 荧光检测器（FLD）的要求更高。 显然，这些检测器还需要具有较高的数据 收集率和小体积流通池。然而， 他们必须能够提供足够的灵敏度，因为 荧光检测通常用于痕量分析。 在复杂矩阵的多化合物分离中，例如 作为食品和食品中的聚芳烃（PAH）分析 饮料，UHPLC与荧光的耦合 检测具有减少运行时间的潜力 并提高色谱分辨率以改善 共同洗脱干扰的鉴别。1获得**支持 在这些应用中，检测器还必须能够 快速改变激发和发射波长 足以完成更改，即使在边际之间 基线分离峰2 要求并演示如何使用 DionexUltiMate®3000 FLD。 背景 从HPLC转移方法的常见策略 UHPLC的目的是保持 使用较短的色谱柱填充较小的色谱柱 3这些较短的分离的结果之一是 分析物峰宽和体积减小。 图1. A）常规HPLC峰的流通池体积 B）UHPLC峰。 UHPLC分离产生小峰 体积，因此需要小体积的检测器流通池。 较小的峰体积需要优化的检测器流量 细胞。这些单元必须提供最低的峰色散，因为 体积最小化和优化的结果 单元内的流量分布。通常，柱外带 如果流通池的体积为 不大于（最小）峰值的大约10％ 4,5在图1A中，≤15 µL的流通池 工作。适用于UHPLC分析物的流通池体积 谱带≤2.7 µL（图1B）。 0.500分钟 乙 色谱柱：3×250 mm，3 µm 流量：0.43 mL / min 峰体积：150 µL 最高15 µL细胞体积 色谱柱：2×50 mm，2.2 µm 流量：0.47 mL / min 峰体积：27 µL 最高2.7 µL细胞体积 280572将荧光检测与UHPLC相结合：技术要求概述 根据比尔朗伯定律，吸收是 与紫外线流通池中的光路成比例，并且 因此，它是UV色谱图的信号强度。 紫外线流通池可以设计为结合相对 长光路，检测量小，节省空间 检测灵敏度的很大一部分 UHPLC分离。 在荧光检测中，信号强度为 大致与照明流量成正比 细胞体积，因为发射的光强度是 与激发分析物的数量成正比。此外， 流动池越小，噪音就越大。超高效液相色谱 因此通常采用荧光检测分离 无法实现与跟踪检测相同的跟踪性能 常规HPLC应用。高度敏感的FLD 专为UHPLC要求而设计，有助于实现两者 UHPLC分离和足够的检测限 大多数应用。 常规FLD成功进行开关检测 常规HPLC分析物峰之间的波长 具有不同的激发和发射要求。 这些检测器开发完成后，波长 几秒钟的切换时间不会影响结果。 UHPLC条件大大缩短了可用时间 所需的光栅运动的时间窗口。的 下面的实验部分将证明 UltiMate 3000 FLD（FLD-3100和FLD-3400RS）是 旨在满足此要求。 设备 系统 Dionex UltiMate 3000第四级快速分离 系统由以下模块组成： SR-3000溶剂架 LPG-3400RS四元泵 WPS-3000RS井板取样器 TCC-3000RS柱温箱 VWD-3400RS可变波长紫外可见探测器 半微量流通池 具有Dual-PMT的FLD-3400RS荧光检测器； 分析和微流通池 带有分析流通池的第三方FLD 所有模块的内径均为0.005英寸（0.13毫米）。 Dionex Viper™配件。 液相色谱条件 淋洗液A：水 洗脱液B：乙腈 第1列：DionexAcclaim®120 C18，3 µm， 3×75毫米（部件号066273） 流速：1.1 mL / m 尽管有波长切换过程，但精度高 它们之间。 分析物 保留 时间 （分钟） RSD保留 时间 （％） 区 （计数*分钟） RSD 区 （％） 萘1.028 0.03 1.21E + 06 0.55 联苯1.266 0.04 3.31E + 05 0.54 芴1.396 0.02 9.38E + 05 0.47 蒽1.584 0.02 1.74E + 06 0.43 荧蒽1.758 0.04 1.61E + 06 0.56 仅约0.5％。保留时间精度为 RSD在0.02至0.03％之间。这些 结果主要是高度精确的结果 四元泵流量和梯度比例 RSLC泵，而且之间的无缝相互作用 不同的系统组件和Chromeleon 软件控制。 图5.获得的五组分标准品的色谱图 使用以前的系统设置，但使用第三方检测器。 波长切换时间太长，无法检测到 连续的高峰。 其他供应商的探测器未针对 支持这些短切换时间。图5显示了 从已经快速的第三方获得的色谱图 FLD，具有与前端相同的前端，定时和管路 图2至图4。仅检测到萘峰 峰之间的波长切换太慢 下一个峰完全或部分迁移 检测器准备好采集流动相之前的流通池 再次发射。 图6比较了Dionex的输出（红色轨迹） 和第三方FLD（蓝色轨迹）。阴影的蓝色区域 代表第三方检测器的切换时间。 两个检测器开始以相同的波长切换 时间，但使用Dionex可以正确检测到联苯 竞争性工具未达到时的FLD 新的检测参数，直到大部分峰 已经退出流通池。第三方检测器 此开关最多需要6.1 s的时间，而 Dionex FLD仅需0.4 s。 图6.使用Dionex FLD（红色）和 第三方检测器（蓝色）。峰不能被检测到 波长切换时洗脱的第三方检测器 时间（蓝色区域）。 28060 计数 0.95 1.90 8.0×107 分钟 -1.0×107 28061 0.95分钟1.90 萘 计数 1.15分钟1.35 6.1秒 28062技术说明92 5 图7.第三方上的波长切换时序 可以优化FLD以检测峰。蓝色区域表示 时间完成波长切换。 图8.六个连续的荧光色谱图的叠加 通过第三方FLD获得。波长切换太长 给定分辨率的时间导致高度不精确 峰积分。 表3.峰精度与 第三方和Dionex FLD 分析物 面积精度 与第三方 FLD（％RSD） 面积精度 与Dionex FLD （％RSD） 萘0.87 0.55 联苯7.80 0.54 芴7.40 0.47 蒽4.24 0.43 荧蒽0.22 0.56 可以修改开关的切换时间 通过反复试验的第三方检测器，可以使峰 显示（图7）。该色谱图看起来很擅长 乍一看，但放大到基线水平可以看到峰值 没有完全显示。保留差异很小 波长的持续时间略有变化 切换过程会对峰积分产生不利影响 极限，因此峰面积精度。 图8显示了六个连续的覆盖图 使用**切换时间检测到进样 第三方FLD和自动峰积分。 峰2至4的峰面积精度不佳 相对标准偏差为4.2％至7.8％（表3）。 得益于出色的波长切换过程， Dionex FLD的所有峰的RSD约为0.5％ 即使是这种苛刻的应用程序。长期影响 例如洗脱液成分略有变化或减少 分离效率也得到了更好的补偿 Dionex FLD的快速切换，并且不影响 区域精度与第三方检测器一样高。 优化的流通池设计 UHPLC的一项要求是减少 柱外体积最小。6优化流量 通道可确保检测器测量小颗粒色谱柱的色谱效率。图9 比较使用a获得的两个亚2分钟分离 3×75 mm，3 µm快速液相色谱柱和Dionex FLD 装有标准液（8 µL，红色痕迹）或 微型（2 µL，蓝色痕迹）流通池。 图9.在3×75 mm上获得的两个间隔的叠加， 3 µm色谱柱，带分析流动池（红色）和微量流 单元格（蓝色）。微流通池具有更好的分辨率， 分析流动池可提供更好的信噪比。 28063 0.95 1.10 1.20 1.30 1.40 1.50 1.60 1.70 1.80 1.90 分钟 萘 联苯 芴蒽 荧蒽 28064 0.95分钟1.90 28734 0.85 1.90 -500,000 4,500,000 计数 Minutes6将荧光检测与UHPLC相结合：技术要求概述 使用分析型流通池获得的所有峰 显示保留时间略有增加， 上一篇： 东莞工厂实验室设备维修
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以高达 200 Hz 的数据速率检测 UHPLC 分离中最窄的峰。